熱啟動直擴型Taq DNA聚合酶說明書

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產品詳情

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本酶為Taq-D DNA聚合酶（KlenTaq1）的熱啟動型，需95度加熱5分鐘或98度加熱2分鐘而激活。Taq-D DNA聚合酶是大腸桿菌重組表達的嗜熱細菌Thermus aquaticus來源的外切酶缺失型Taq DNA聚合酶（刪除了5’ 外切酶結構域）。該酶具有5’→3’聚合酶活性，無5’→3’外切酶活性和3’→5’外切酶活性。擴增產物具有3'-dA尾巴。不可用于Taqman探針法q-PCR。本酶經基因工程改造，尤其適合于溶解曲線法單核苷酸多態性（SNP）分型。擴增片段的長度可達3 kb。延伸速度為1.0 kb/min（72℃）。

特點

· 本酶為熱啟動聚合酶，可提高擴增的特異性，減少非特異性擴增和引物二聚體；

· 熱穩定性好：95℃下半衰期超過40 min；

· 模板DNA耐受范圍廣；

· PCR產物具有3’-dA尾巴，可直接用于T/A克??；

· 可以摻入dUTP、dITP、熒光標記核苷酸。

· 相比普通Taq DNA 聚合酶，本酶更加適合未處理的血液、組織、唾液等樣本的PCR；

濃度

2.5U/μl

活性定義

以大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，在72℃、30 min內，將10 nmole脫氧核糖核苷酸摻入到酸不溶物中所需的酶量，定義為一個活性單位（U）。

酶貯存緩沖液

20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P40, 0.5% Tween 20, and 50% glycerol.

產品包裝規格及組成

運輸與保存

-20℃保存 冰袋運輸

適用范圍

·      溶解曲線法單核苷酸多態性（SNP）分型

·      DNA熒光標記

·      血液、組織樣本等直擴PCR

應用舉例

以下反應舉例為50 μl標準PCR體系， 僅供參考。實際PCR條件應根據模板、引物、目的片段大小加以優化，確定最佳反應條件。

     *DNA template可參照如下標準（50 μl PCR體系）：

  PCR反應條件

注意事項

·      本酶為熱啟動聚合酶，需95度加熱5分鐘或98度加熱2分鐘而激活；因此有利于提高擴增的特異性，減少非特異性擴增和引物二聚體，得到良好的PCR結果。

·      Taq-D DNA聚合酶具有脫氧核苷酸轉移酶活性，因此在PCR產物3’末端通常會加上1個多余的腺嘌呤。

· 堿基出錯率是指在每個堿基合成過程中所摻入的錯誤核苷酸數目。Taq-D DNA聚合酶的堿基錯誤率為1×10^-5。

· 對非熱啟動酶而言，建議在冰上配置PCR 反應液后，再放入PCR儀中進行擴增。這有利于提高擴增的特異性，減少非特異性擴增，得到良好的PCR結果。

· 如進行PCR擴增后，除目的條帶外，還伴隨其他雜帶，建議適當減少體系中的酶用量，以增加PCR擴增反應的特異性

· 本公司Buffer經大量PCR反應實例優化而成，然而對某些PCR反應存在一個鎂離子濃度。若需要優化鎂離子濃度，請購買本公司不含鎂離子的buffer和MgCl₂/MgSO₄。

     本產品僅限科研實驗使用，臨床應用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫療臨床診斷。

質量控制

相關測試表明無外源內切酶或外切脫氧核糖核酸酶污染。PCR方法檢測無宿主殘余DNA，能有效擴增人基因組中的單拷貝基因。

室溫放置一周，擴增活性無明顯改變；但強烈建議不要在室溫下長期放置，用畢放回-20度。