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熱啟動直擴型Taq DNA聚合酶(dNTP)說明書

 更新時間:2024-07-30 點擊量:1408

熱啟動直擴型Taq DNA聚合酶(dNTP)說明書

上海起發生物科技有限公司(Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.)屬于上海起發實驗試劑有限公司(2009年成立)旗下的子公司,成立的初衷是建立上海起發生物自有品牌,打造優質的生物試劑民族自有品牌。降低成本的同時,把好生物產業鏈中的國產生物試劑品質關。未來讓每一個和我們一樣擁有民族情懷的企業,共同創世界優秀的中國生物制造企業,圓夢中國。

產品詳情

貨號

規格

78DC10014-250U

250U

78DC10014-250U×5

250U×5

78DC10014-1250U×4

1250U×4

78DC10014-2500U×5

2500U×5

產品詳情

本酶為Taq-D DNA聚合酶KlenTaq1)的熱啟動型,需95度加熱5分鐘或98度加熱2分鐘而激活Taq-D DNA聚合酶是大腸桿菌重組表達的嗜熱細菌Thermus aquaticus來源的外切酶缺失型Taq DNA聚合酶(刪除了5’ 外切酶結構域)。該酶具有5’→3’聚合酶活性,無5’→3’外切酶活性和3’→5’外切酶活性。擴增產物具有3'-dA尾巴。不可用于Taqman探針法q-PCR。本酶經基因工程改造,尤其適合于溶解曲線法單核苷酸多態性(SNP)分型。擴增片段的長度可達3 kb。延伸速度為1.0 kb/min(72℃)。

特點

· 本酶為熱啟動聚合酶,可提高擴增的特異性,減少非特異性擴增和引物二聚體;

· 熱穩定性好:95℃下半衰期超過40 min;

· 模板DNA耐受范圍廣;

· PCR產物具有3’-dA尾巴,可直接用于T/A克隆;

· 可以摻入dUTP、dITP、熒光標記核苷酸。

· 相比普通Taq DNA 聚合酶,本酶更加適合未處理的血液、組織、唾液等樣本的PCR;

濃度

2.5U/μl

活性定義

以大馬哈魚精子DNA作為模板/引物,在72℃、30 min內,將10 nmole脫氧核糖核苷酸摻入到酸不溶物中所需的酶量,定義為一個活性單位(U)。

酶貯存緩沖液

20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P40, 0.5% Tween 20, and 50% glycerol。

產品包裝規格及組成

Component

78DC10013-250u

78DC10013-250U×5

78DC10013-1250U×4

78DC10013-2500U×5

HS Taq-D DNA polymeraseKlenTaq1 dNTP)

250U

250U×5

1250U×4

2500U×5

10×Taq-D Buffer

0.5 ml×1

0.5 ml×5

1.0 ml×10

1.0 ml×25

2 mM dNTPs

0.5 ml×1

0.5 ml×5

1.0 ml×10

1.0 ml×25

運輸與保存

-20℃保存 冰袋運輸

適用范圍

·      溶解曲線法單核苷酸多態性(SNP)分型

·      DNA熒光標記

·      血液、組織樣本等直擴PCR

應用舉例

以下反應舉例為50 μl標準PCR體系, 僅供參考。實際PCR條件應根據模板、引物、目的片段大小加以優化,確定最佳反應條件。

組份

體積/μl

終濃度

10×Taq-D Buffer

5

dNTPs(2.0 mM)

5

0.2 mM

引物F(10 μM)

1.5

0.3 μM

引物R(10 μM)

1.5

0.3 μM

Template

Varable*

/

HS Taq-D(2.5U/μl)

1.0

2.5U

ddH2O

Varable

/

總體積

50

/

     *DNA template可參照如下標準(50 μl PCR體系):

人類基因組DNA

0.1 μg-1 μg

λDNA

0.5 ng-5 ng

質粒DNA

0.01 ng-1 ng

大腸桿菌DNA

10 ng-100 ng

  PCR反應條件

95℃

5 min


95℃

15 sec


55~72℃

20 sec

30 Cycles

72℃

1 min/kb


72℃

5 min


注意事項

·      本酶為熱啟動聚合酶,需95度加熱5分鐘或98度加熱2分鐘而激活;因此有利于提高擴增的特異性,減少非特異性擴增和引物二聚體,得到良好的PCR結果。

·      Taq-D DNA聚合酶具有脫氧核苷酸轉移酶活性,因此在PCR產物3’末端通常會加上1個多余的腺嘌呤。

· 堿基出錯率是指在每個堿基合成過程中所摻入的錯誤核苷酸數目。Taq-D DNA聚合酶的堿基錯誤率為1×10-5

· 對非熱啟動酶而言,建議在冰上配置PCR 反應液后,再放入PCR儀中進行擴增。這有利于提高擴增的特異性,減少非特異性擴增,得到良好的PCR結果。

· 如進行PCR擴增后,除目的條帶外,還伴隨其他雜帶,建議適當減少體系中的酶用量,以增加PCR擴增反應的特異性

· 本公司Buffer經大量PCR反應實例優化而成,然而對某些PCR反應存在一個鎂離子濃度。若需要優化鎂離子濃度,請購買本公司不含鎂離子的buffer和MgCl2/MgSO4

     本產品僅限科研實驗使用,臨床應用安全性和有效性未鑒定,不可用于醫療臨床診斷。

質量控制

相關測試表明無外源內切酶或外切脫氧核糖核酸酶污染。PCR方法檢測無宿主殘余DNA,能有效擴增人基因組中的單拷貝基因。

室溫放置一周,擴增活性無明顯改變;但強烈建議不要在室溫下長期放置,用畢放回-20度。



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