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qa-bio糖苷內(nèi)切酶說明書

 更新時間:2021-05-20 點擊量:2185

 

qa-bio糖苷內(nèi)切酶說明書

-糖苷內(nèi)切酶可從糖蛋白上裂解完整的聚糖-
在清潔制劑中具有高度穩(wěn)定的酶-不含甘油,NaCl或其他添加劑(如EDTA)。
-測試所有酶是否沒有蛋白水解或意外的糖苷活性

糖苷內(nèi)切酶是糖蛋白分析中使用*泛的一些酶。這些酶從糖蛋白中釋放出完整的聚糖,而外切糖苷酶則釋放出單個的單糖(即唾液酸,半乳糖,β-N-乙酰葡糖胺,甘露糖等)。

盡管PNGase F實際上是酰胺酶,但由于它具有類似的裂解完整的N-連接聚糖的活性,因此通常被包括在酶組中。它在天冬酰胺氨基酸和N-連接聚糖的殼二糖核心的ß-N-乙酰氨基葡糖糖(GlcNAc)之間裂解。Endo F酶和Endo H在第一個和第二個GlcNAc之間裂解N-連接的聚糖,留下親水殘基,這有助于增加去糖基化蛋白質(zhì)的溶解度,減少蛋白質(zhì)聚集物沉淀的可能性。PNGase F裂解所有N-連接的聚糖,而Endo H和Endo F酶則去除特定類型的N-連接的聚糖。PNGase F不會去除通常在植物糖蛋白上發(fā)現(xiàn)的含有與α-(1,3)連接的核心巖藻糖的寡糖。

O-糖苷酶也包括在這種酶的分類中,其從絲氨酸或蘇氨酸氨基酸中去除了核心1 O-連接的聚糖(Gal-β1,3-GalNAc)。通常,O-連接的聚糖含有在分支和線性連接中均與半乳糖連接的另外的單糖,需要使用外切糖苷酶,例如唾液酸酶和半乳糖苷酶來除去另外的糖。

 

PNG酶F

PNGase F從糖蛋白上裂解N-連接(天冬酰胺連接)的寡糖。

酶在37°C時保持*活性至少96小時。

查看產(chǎn)品文檔:
Specsheet   CofA   SDS

部件號–酶的量
E-PNG01 – 60 µLs¹ 
E-PNG01-20 – 20 µLs¹ 
E-PNG01-200 – 200 µls²(以前為E-PNG05)
¹包含緩沖液,變性劑,Triton- 
X²僅包含酶

 

 

 

 

PNG酶F

 

PNGase F從糖蛋白上裂解N-連接(天冬酰胺連接)的寡糖。

酶在37°C時保持*活性至少96小時。

查看產(chǎn)品文檔:
Specsheet   CofA   SDS

部件號–酶的量
E-PNG01 – 60 µLs¹ 
E-PNG01-20 – 20 µLs¹ 
E-PNG01-200 – 200 µls²(以前為E-PNG05)
¹包含緩沖液,變性劑,Triton- 
X²僅包含酶

PNG酶F

 

PNGase F從糖蛋白上裂解N-連接(天冬酰胺連接)的寡糖。

酶在37°C時保持*活性至少96小時。

查看產(chǎn)品文檔:
Specsheet   CofA   SDS

部件號–酶的量
E-PNG01 – 60 µLs¹ 
E-PNG01-20 – 20 µLs¹ 
E-PNG01-200 – 200 µls²(以前為E-PNG05)
¹包含緩沖液,變性劑,Triton- 
X²僅包含酶

 

產(chǎn)品描述

 

PNGase F,肽N糖苷酶F,N-糖苷酶,N-糖苷酶

PNGase F從糖蛋白上裂解N-連接(天冬酰胺連接)的寡糖。該酶將天冬酰胺脫氨為天冬氨酸,使寡糖保持完整。PNGase F不會去除通常在植物糖蛋白上發(fā)現(xiàn)的含有Alpha-(1,3)連接的核心巖藻糖的寡糖;為此,請使用肽N-糖苷酶A。

變性增加了切割速率。大多數(shù)天然蛋白質(zhì)仍可以*被N-去糖基化,但是孵育時間可能需要增加。該酶在反應(yīng)條件(37°C)下將保持*活性至少96小時。

有許多替代酶可用于去除N-聚糖,尤其是Endo F家族的酶和EndoH。這些酶在寡糖核心的兩個N-乙酰氨基葡萄糖殘基之間裂解,生成截短的糖分子上具有一個N-乙酰氨基葡糖殘基殘留在天冬酰胺上。這樣可以提高溶解度,將蛋白質(zhì)保留在溶液中,然后用PNGase F進行糖基去糖基化處理后沉淀出來,這樣就可以完整清除寡糖。遠藤F1裂解高甘露糖和一些雜合型N聚糖。Endo F2將消除雙天線和高甘露糖(降低40倍的速率)。內(nèi)三醇和巖藻糖基化雙觸角N-聚糖的Endo F3釋放。遠藤H 去除雜質(zhì)和高甘露糖聚糖。

來源 Elizabethkingia miricola(曾是Meningosepticum的Chryseobacterium meningosepticum

EC 3.5.1.52 PDB 1PGS UniProt Q9XBM8

pH 7.5的20 mM Tris-HCl中的PNGase F含量

包括20 µL和60 µL的包裝大小:
5倍反應(yīng)緩沖液7.5 – 250 mM磷酸鈉,pH 7.5
變性溶液– 2%SDS,1 M Beta-巰基乙醇
Triton X-100 – 15%溶液

比活度> 25 U / mg

活性5 U / ml

分子量35,000道爾頓

pH范圍6-10,最佳7.5

方案
1.在Eppendorf管中加入200 µg糖蛋白。用去離子水將最終體積調(diào)整為35 µl。
2.加入10 µl 5x反應(yīng)緩沖液7.5和2.5 µl變性溶液。在100°C加熱5分鐘。
3.酷。加入2.5 µl Triton X-100并混合。
4.向反應(yīng)中添加2.0 µl酶。在37°C下孵育3小時。

特異性裂解所有天冬酰胺連接的復(fù)合,雜合或高甘露糖寡糖,除非巖藻糖基化了α(1-3)核心;否則將其切掉。天冬酰胺必須在兩個末端均肽鍵結(jié)合,無Endo F

比活性定義為在37°C,pH 7.5下1分鐘內(nèi)催化從1微摩爾變性RNase B中釋放N-連接寡糖所需的酶量。通過SDS-PAGE監(jiān)測切割(切割的RNase B遷移更快)。

儲存將儲存在4°C。

 

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