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qa-bio去糖基化試劑盒

 更新時間:2020-01-21 點擊量:2882

 

 

qa-bio去糖基化試劑盒

QA-Bio提供易于使用的去糖基化試劑盒,可在天然和變性條件下從糖蛋白中去除N-連接和O-連接的聚糖。

PNGase F通常用于在變性和天然條件下都只對含有N-連接聚糖的糖蛋白進行去糖基化。對于被PNGase F緩慢裂解的天然樣品或在PNGase F消化后沉淀的天然樣品,建議使用我們的Endo F Multi-Kit。兩種方法均能使聚糖完整無損,并可供進一步分析。

如果聚糖類型未知,或者同時包含N-和O-聚糖,則建議使用我們的Enzymatic CarboRelease Kit或Enzymatic DeGlycoMx Kit。這些去糖基化試劑盒包括許多酶,這些酶會去除聚糖并將其消化成單糖。在DeglycoMx試劑盒中,酶以預混合的酶混合物的形式包裝在一個20升的小瓶中。對于CarboRelease試劑盒,酶分別在20微升的小瓶中單獨提供,從而在測定設計中具有更大的靈活性。

LudgerLiberate水解酶解試劑盒包含用于從糖蛋白生物制藥中釋放N和O聯聚糖的試劑。釋放的聚糖具有自由的還原末端,可以通過還原胺化進行熒光標記。釋放條件可以針對N-聚糖,O-聚糖或N-和O-聚糖兩者的釋放進行優化。

對于釋放和回收O-連接的聚糖,我們建議使用Ludger Orela試劑盒。

去糖基化糖蛋白圖像

酶促碳釋放試劑盒

該試劑盒包括使糖蛋白去糖基化,去除所有N-連接的寡糖和許多O-連接的糖所需的酶和緩沖液。

酶被分別包裝在單獨的20微升小瓶中。與我們的酶混合物KE-DGMX相比,這使研究人員可以靈活地更充分地表征與其糖蛋白相連的聚糖。

 

零件編號:KE-DG01

單個糖苷酶的適當使用可以確定唾液酸化(僅使用唾液酸酶)和N-連接聚糖(僅使用PNGase F)和O-連接聚糖(使用唾液酸酶,β-半乳糖苷酶,O-糖苷酶和葡萄糖苷酶)的特定存在)。或者,QA-Bio在我們的DeGlycoMx試劑盒(KE-DGMX)中的一個20升小瓶中產生酶的預混合溶液。


包括以下每種酶的20微升:

  • PNGase F(腦膜炎桿菌
  • O-糖苷酶(肺炎鏈球菌
  • 唾液酸酶(脲節桿菌
  • β-半乳糖苷酶(肺炎鏈球菌
  • 葡萄糖苷酶(肺炎鏈球菌

其他提供的試劑:

 

  • 反應緩沖液
  • 變性溶液
  • 海衛一
  • 牛胎球蛋白(對照)
去糖基化圖像

特異性
CarboRelease酶試劑盒將糖蛋白去糖基化,從糖蛋白中去除所有N-連接的寡糖和許多O-連接的寡糖。使用酶PNGase F去除N-連接(天冬氨酸連接)。此外,所有絲氨酸或蘇氨酸連接(O連接)Gal-(b1-3)-GalNAc-(a1)和所有唾液酸取代的Gal-( b1-3)-GalNAc-(a1)將使用唾液酸酶和O-糖苷酶的組合去除。β-半乳糖苷酶和葡糖胺苷酶的加入將有助于較大的O-鏈結構的去糖基化。

試劑盒容量
方案中推薦的酶量足以在給定時間內將約100μg的平均糖蛋白去糖基化。PNGase F裂解通常是限速反應,這是由于緩慢清除一些空間受阻的N連接殘基,即使糖蛋白變性也是如此。由于所有酶在反應條件下都可以保留幾天的活性,因此,如果延長孵育時間,則大量的糖蛋白可能會被去糖基化。相反,如果裂解的糖蛋白量遠小于100μg,則無需使用推薦量的酶。可以將這些酶稀釋到1X反應緩沖液7中。它們將在4°C下以稀釋形式保持穩定。

牛胎球蛋白控制蛋白
牛胎球蛋白包含唾液酸化的N和O連接寡糖13。
注意:胎球蛋白的商業制劑中包含的蛋白酶會終降解該蛋白。Fetuin Control已在90°C熱處理10分鐘,以使蛋白酶失活。Fetuin溶液可以在4℃下保存。

變性方案
1.在Eppendorf管中的30 µL去離子水中溶解100 µg或更少的糖蛋白。
2.加入10μL5X反應緩沖液7和2.5μL變性溶液。輕輕混合。
3.在100°C加熱5分鐘。
注意:與SDS一起加熱時,某些蛋白質可能會沉淀。在這種情況下,請省略熱處理,并在添加酶后將孵育時間延長至24小時。
4.冷卻至室溫。加入2.5μlTriton X-100溶液。輕輕混合。

注意:未添加Triton X-100可能會導致某些酶的活性降低。
5.每種酶各添加1μL。
6.在37°C下孵育3小時。
?7.按選擇的方法進行分析。

或者,可以單獨或順序添加酶,以確定糖蛋白上存在何種類型的寡糖。

非變性方案
1.在Eppendorf管中的35μL去離子水中溶解100μg或更少的糖蛋白。
2.添加10μL5X反應緩沖液7。3 
?.添加1μL每種酶。
?4.在37°C下孵育1-5天。

應使用變性方案將等分試樣去糖基化,以提供*去糖基化蛋白質的凝膠標準品。然后可以將天然蛋白質的位置與此標準品進行比較,以判斷去糖基化的程度。

 

 

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